小鼠白细胞介素2定量分析酶联免疫检测试剂盒

本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测小鼠血清
、血浆或细胞培养上清液中的IL-2浓度
。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整,如有产品包装破损或质量投拆
，请在收到货一个月之内联系尊龙凯时人生就是搏。

IL-2简介
：

IL-2是一种主要由T淋巴细胞产生的多效性的细胞因子
，成熟的鼠IL-2是149个氨基酸的糖蛋白，由169个氨基酸的前体蛋白通过剪切而成为成熟的蛋白。

IL-2 在抗体刺激引起的不同反应阶段的T细胞


，自然杀伤细胞和B细胞的细胞增殖方面起重要的作用，此外，IL-2还可调节γ干扰素

、主要组织相容性抗原的表达


，刺激活化的B细胞的增殖和分化
，提高自然杀伤细胞的活性和抑制粒细胞/巨噬细胞的的增殖
。IL-2还可诱导少胶突细胞的增殖和分化
。

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中小鼠IL-2的浓度


。小鼠IL-2捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时









，其中的小鼠IL-2会与捕获抗体结合



，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去
。当加入生物素化的抗小鼠IL-2抗体后
，抗小鼠IL-2抗体与小鼠IL-2接合

，形成夹心的免疫复合物


，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素


。生物素与亲合素特异性结合
，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来
；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在IL-2将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质
，在加入终止液后呈黄色

。通过酶标仪检测
，读其450nm处的OD值

，小鼠IL-2浓度与OD₄₅₀值之间呈正比

，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值

，即可算出标本中IL-2浓度
。

小鼠IL-2定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:

标本收集:

1.标本的收集请按下列流程进行操作
；

A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；

B.血清标本应是自然凝固后，取上清
，避免在冰箱中凝固血液


；

C.血浆标本

，推荐用EDTA的方法收集


；

D.若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装
，冻存于－20℃
，避免反复冻融。

2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂
；

3.标本应清澈透明
，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。

4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测




，否则结果将不准确

。

注：小鼠血清或血浆样本请用样本分析缓冲液做倍比稀释后再检测




。

注意事项:

1.试剂盒请保存在2～8℃。

2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液
。

3.标准品复溶加样后，剩余部份请丢弃
。

4.底物请勿接触氧化剂和金属。

5.加样时
，请及时更换枪头，避免交叉污染



。

6.严禁混用不同批号的试剂盒组份





。

7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。

8.室温反应，请严格控制在25～28℃


。

9.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。

11.加样过程中避免气泡的产生。

12.血清和血浆标本的检测时
，检测抗体的孵育时间应适当延长
。

检测前准备工作:

1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温(25～28℃)平衡20分钟



；每次检测后剩余试剂请及时于2～8℃保存。

2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)。

3.如有5X准品稀释液
，请按所需量用双蒸水或去离子水稀释(1份加4水)。

4.标准品: 按标签复溶体积加入标准品稀释液复溶使IL-2终浓度达到1000pg/ml，室温反应
，请严格控制在25～28℃，静置10~15分钟后轻轻混悬（建议抽吸几次）待彻底溶解
，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。（标准曲线取七个点

，最高浓度为1000 pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）

洗涤方法:

自动洗板机或人工洗板：每孔洗涤液为300ul

，注入与吸出间隔15-30秒

。洗板5次。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。

实验过程需自备的材料


：

1.不同规格的加样枪及相应的枪头
；   

2.酶标仪
；

3.自动洗板机
；                 

4.去离子水或双蒸水

；

操作步骤:

1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内
，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封
，保存于4℃。

2.建议设置本底较正孔
，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线







。

3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中
，用封板胶纸封住反应孔，室温(25～28℃)孵育120分钟

。对于血清或血浆标本

，请加入50 ul样本分析缓冲液后加50 ul标本
，如稀释量大
，请将样本与样本分析缓冲液等量加入
，不足部分用标准品稀释液补充至100ul。      

4.洗板5次
，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔


，室温(25～28℃)孵育60分钟

。    

6.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干


。

7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔)



。用封板胶纸封住反应孔
，避光室温(25～28℃)孵育20分钟。

8.洗板5次
，且最后一次置厚吸水纸上拍干
。

9.加入显色剂TMB100ul/孔

，避光室温(25～28℃)孵育20分钟


。

10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD₄₅₀值。

结果判断:

1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效
，复孔的值平均后可作为测量值
。

2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。

3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标

，以平滑线连接各标准品的坐标点

。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。

4.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测
，计算浓度时应乘以稀释倍数



。

典型数值和参考曲线

小鼠IL-2参考标准曲线

注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量

。

灵敏度
，特异性和重复性:

1.灵敏度：多次重复结果表明

，最小检出量为7.7pg/ml
。

2.特异性


：与鼠C10、G-CSF、GM-CSF








、IFN-
、IL-1





、IL-3


、IL-5、IL-6、IL-9
、IL-13
、JE
、KC
、LIF



、M-CSF、MIP-1


、MIP-2SCF

、TNF、Tpo





、VEGF和人IL-2、 IL-2 \Sr等没有交叉反应。

3.重复性



：板内，板间变异系数均<10%.

参考文献:

Kuziel and Greene, 1990  J. Invest. Dermatol., 94:275

Parkinson et al., 1988  J.  Immunol. Methods, 15:105