产品说明(可下载)小鼠IL-22定量分析酶联免疫检测试剂盒
本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测小鼠血清 、血浆或细胞培养上清液中的IL-22浓度 。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整, 如有产品包装破损或质量投拆 ，请在收到货一个月之内联系尊龙凯时人生就是搏 。
IL-22简介 ：
白细胞介素22(IL-22) ，属于IL－10细胞因子家族 ，该家族其它成员包括IL-10, IL-19, IL-20, IL-24和 IL-26等 ，这些成员都有一部分相同的氨基酸序列，但生物功能却是迥异的。
IL-22主要由活化的Th1型T细胞和NK细胞分泌 ，主要作用于上皮细胞和炎症反应 ，小鼠的IL-22的cDNA编码含33个氨基酸信号肽的179个氨基酸的蛋白 ，与大鼠的IL-22有82%的同源性 ，与人的IL-10有78%的同源性。
IL-22通过Th2细胞抑制IL-4的产生 ，能够在肝和胰脏内诱导产生急性相反应物 ，IL-22的信号都是通过都属于II型细胞因子受体的IL-22R和IL-10R-β/CRF2-4来介导的 。
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中小鼠IL-22的浓度 。小鼠IL-22捕获抗体已预包被于酶标板上 ，当加入标本或参考品时 ，其中的小鼠IL-22会与捕获抗体结合 ，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。当加入生物素化的抗小鼠IL-22抗体后 ，抗小鼠IL-22抗体与小鼠IL-22接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素 。生物素与亲合素特异性结合 ，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在IL-22将会形成免疫复合物 ，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测 ，读其450nm处的OD值 ，小鼠IL-22浓度与OD450值之间呈正比 ，通过参考品绘制标准曲线 ，对照未知样本中OD值 ，即可算出标本中IL-22浓度 。
小鼠IL-22定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:
组分 | 规格（96T/48T） |
小鼠IL-22预包被板 | 12条/6条 |
标准品稀释液 | 10ml/5ml |
小鼠IL-22标准品 | 2支/1支(冻干) |
小鼠IL-22生物素化抗体 | 10ml/5ml |
亲和素连接的HRP酶 | 10ml/5ml |
浓缩洗涤液 20× | 30ml/15ml |
TMB底物 | 10ml/5ml |
中止液 | 5ml/3ml |
封板胶纸 | 3/2张 |
说明书 | 1份 |
标本收集:
1.标本的收集请按下列流程进行操作 ；
A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可 ；
B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；
C.血浆标本 ，推荐用EDTA的方法收集
D.若待测样本不能及时检测 ，标本收集后请分装 ，冻存于－20℃ ，避免反复冻融。
2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂 ；
3.标本应清澈透明 ，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。
4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测 ，否则结果将不准确 。
注意事项:
1.试剂盒请保存在2～8℃ 。
2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶 ，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液 。
3.标准品复溶加样后 ，剩余部份请丢弃 。
4.底物请勿接触氧化剂和金属 。
5.加样时 ，请及时更换枪头 ，避免交叉污染 。
6.严禁混用不同批号的试剂盒组份 。
7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀 。
8.室温反应 ，请严格控制在25～28℃ 。
9.洗涤过程是至关重要的 ，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。
11.加样过程中避免气泡的产生。
12.血清和血浆标本的检测时，检测抗体的孵育时间应适当延长 。
检测前准备工作:
1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温（25-28℃）平衡20分钟 ；每次检测后剩余试剂请及时于2～8℃保存 。
2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)。
3. 如有5×标准品稀释液用双蒸水或去离子水稀释(1份加4份水) 。
4.标准品:按标签复溶体积加入标准品稀释液使IL-22终浓度达到2000pg/ml，室温反应 ，请严格控制在25～28℃，静置15~20分钟后轻轻混悬（建议抽吸几次）待彻底溶解 ，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。（标准曲线取七个点 ，最高浓度为2000pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）
洗涤方法:
自动洗板机或人工洗板 ：每孔洗涤液为300ul ，注入与吸出间隔15-30秒 。洗板5次。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干 。
实验过程需自备的材料：
1.不同规格的加样枪及相应的枪头 ；
2.酶标仪 ；
3.自动洗板机 ；
4.去离子水或双蒸水；
操作步骤:
1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数 ，取出所需板条放置在框架内 ，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封 ，保存于4℃ 。
2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线 。
3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中 ，用封板胶纸封住反应孔 ，室温（25-28℃）孵育120分钟 。
4.洗板5次 ，且最后一次置厚吸水纸上拍干 。
5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔) 。用封板胶纸封住反应孔，室温（25-28℃）孵育60分钟 。
6.洗板5次 ，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
7.加入HRP酶结合物工作液(100ul/孔) 。用封板胶纸封住反应孔，避光室温（25-28℃）孵育20分钟。
8.洗板5次 ，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
9.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温（25-28℃）孵育20分钟 。
10.加入中止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值 。
结果判断:
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值 。
3.手工绘制标准曲线 。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度 。
4.若标本OD值高于标准曲线上限 ，应适当稀释后重测 ，计算浓度时应乘以稀释倍数 。
典型数值和参考曲线
浓度pg/ml | 典型OD值1 | 典型OD值2 | OD平均值 |
0 | 0.069 | 0.074 | 0.0715 |
62.5 | 0.276 | 0.251 | 0.2635 |
125 | 0.47 | 0.465 | 0.4675 |
250 | 0.817 | 0.806 | 0.8115 |
500 | 1.187 | 1.124 | 1.1555 |
1000 | 1.729 | 1.709 | 1.719 |
2000 | 2.435 | 2.384 | 2.4095 |
小鼠IL-22参考标准曲线
注意 ：本图仅供参考 ，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。
灵敏度 ，特异性和重复性:
1.灵敏度：多次重复结果表明 ，最小检出量为22.6pg/ml 。
2.特异性 ：与小鼠IL-15,IL-20,IL-22R,IL-29,Leptin,LIF,MIF, TNF-α,TNF-β等没有交叉反应 。
3.重复性 ：板内 ，板间变异系数均<10%.
参考文献:
1. Pestka, S. et al. (2004) Annu. Rev. Immunol. 22:929.
2. Xie, M.H. et al. (2000) J. Biol. Chem. 275:31335.
3. Kotenko, S.V. and J.A. Langer. (2004) Int. Immunopharmacol. 4:593.
4. Boniface, K. et al. (2005) J. Immunol. 174:3695.
5. Nagalakshmi, M.L. et al. (2004) Int. Immunopharmacol. 4:679.
6. Ikeuchi, H. et al. (2005) Arthritis Rheum. 52:1037.9.
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