货号

M029

种属

小鼠

细胞来源

ATCC/中科院/协和医院等地引进

生长特性

贴壁 成纤维细胞样

培养条件

培养基

：DMEM（含1.5g/L 碳酸氢钠）+10%FBS (推荐HAKATA优等胎牛血清
，货号:HN-FBS-500)

温度




：37℃     气相

：95%空气
，5%二氧化碳

传代

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒

，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲
，.然后置于无菌操作台

，打开瓶口





，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代


，一般2天换一次液












；

2.待细胞长满瓶底面积70-80%，需要对其进行传代
，传代比例为1:2-1:4




；

3传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37℃预热，倒掉培养瓶中的培养基



，往培养瓶中加入3-5 ml PBS

，轻晃洗涤后弃去

。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于室温孵育消化（第一次消化需置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆
、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间
，记录最佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培养基终止消化



。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞


，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1000rpm离心3min

，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代

。

保存

冻存条件：70%完全培养基+20%FBS+10%DMSO

(备注：建议使用本公司的冷冻液（H-W-100）
，用4度保存的冷冻液直接重悬细胞




，不能预热后使用
。)

保存条件：液氮存储

供应限制

仅供研究之用

常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以尊龙凯时人生就是搏会及时安排帮老师解决


。

2.收到细胞后尽快更换为新鲜培养基

。

3.细胞漂浮


：培养瓶不开封
，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱



。1-2小时后观察




，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常


，剩余漂浮的细胞可以去掉，留8-10ml培养液培养观察
，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代


；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶
，原培养瓶加部分培养液继续培养
，中间注意观察
，尊龙凯时人生就是搏的技术人员会一直跟踪指导


，直到问题解决。