产品说明(可下载)AXL 定量分析酶联免疫检测试剂盒
本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测人血清 、血浆或细胞培养上清液中的AXL 浓度 。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整。如有产品包装破损或质量投拆 ，请在收到货一个月之内联系尊龙凯时人生就是搏。
AXL简介 ：
Axl，也叫Ufo和Ark，是AXL 酪氨酸受体激酶的三个组成成分中的一个 ，另外两个成分是mer 和Tyro3 。AXL是一个跨膜蛋白 ，胞外区（ECD）由426个氨基酸构成的两个免疫球蛋白样结构域和两个纤连蛋白III型结构域 ，21个氨基酸的穿膜结构区连接包含酪氨酸激酶结构域的由422个氨基酸组成的胞内结构 。
AXL是一个广泛表达的140 kDa的糖蛋白 ，通过与依赖维生素K的Gas6基因的蛋白产物结合而自磷酸化胞内激酶部分。
AXL 作为酪氨酸受体激酶的三个组成成分中的一个 ，最新的研究表明，这个AXL家族的酪氨酸激酶受体可能与造血过程、胚胎发育 、及睾丸功能的调控、生理平衡 、炎症反应，自身免疫、肿瘤发生及恶化等生理过程有关 。
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中AXL的浓度 。AXL捕获抗体已预包被于酶标板上 ，当加入标本或参考品时，其中的AXL会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的AXL抗体后，抗AXL抗体与AXL接合，形成夹心的免疫复合物 ，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合 ，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来 ；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。最后加入显色剂 ，若样本中存在AXL将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测 ，读其450nm处的OD值，AXL 浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线 ，对照未知样本中OD值 ，即可算出标本中AXL浓度 。
AXL定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:
组分 | 规格（96T/48T） |
AXL预包被板 | 12条/6条 |
样本分析缓冲液 | 5ml/3ml |
5X标准品稀释液 | 10ml/5ml |
AXL标准品 | 2支/1支(冻干) |
AXL生物素化抗体 | 10ml/5ml |
亲和素连接的HRP酶 | 10ml/5ml |
浓缩洗涤液 20× | 30ml/15ml |
TMB底物 | 10ml/5ml |
中止液 | 5ml/3ml |
封板胶纸 | 3/2张 |
说明书 | 1份 |
标本收集:
1.标本的收集请按下列流程进行操作；
A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可 ；
B.血清标本应是自然凝固后 ，取上清 ，避免在冰箱中凝固血液 ；
C.血浆标本 ，推荐用EDTA的方法收集 ；
D.若待测样本不能及时检测 ，标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融 。
2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂 ；
3.标本应清澈透明 ，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。
注 ：人血清或血浆样本请用样本分析缓冲液做倍比稀释后再检测 。
注意事项:
1.试剂盒请保存在2～8℃ 。
2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液 。
3.标准品复溶加样后 ，剩余部份请丢弃。
4.底物请勿接触氧化剂和金属 。
5.加样时 ，请及时更换枪头，避免交叉污染 。
6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。
7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要 ，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀 。
8.室温反应 ，请严格控制在25-28℃。
9.洗涤过程是至关重要的 ，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大 。
10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔 。
11.加样过程中避免气泡的产生。
12.血清和血浆标本的检测时 ，检测抗体的孵育时间应适当延长
检测前准备工作:
1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温（25-28℃）平衡20分钟 ；每次检测后剩余试剂请及时于2～8℃保存 。
2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水) 。
3. 5×标准品稀释液用双蒸水或去离子水稀释(1份加4份水)。
4.标准品: 按标签复溶体积加入1X标准品稀释液复溶使AXL 终浓度达到4000pg/ml，室温反应 ，请严格控制在25～28℃ ，静置10~15分钟后轻轻混悬（建议抽吸几次）待彻底溶解 ，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中 。（标准曲线取七个点 ，最高浓度为4000 pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0 浓度.）
洗涤方法:
自动洗板机或人工洗板：每孔洗涤液为300ul ，注入与吸出间隔15-30秒 。洗板5次 。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干 。
实验过程需自备的材料：
1.不同规格的加样枪及相应的枪头 ；
2.酶标仪 ；
3.自动洗板机；
4.去离子水或双蒸水；
操作步骤:
1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内 ，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封 ，保存于4℃ 。
2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。
3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中 ，用封板胶纸封住反应孔 ，室温（25-28℃）孵育120分钟。如果是血清血浆样本 ，不同样本稀释比例不一样 ，一般范围在10~100倍，如无明确范围 ，建议从10倍开始 ，加样稀释说明如下 ：每孔先加样本分析缓冲液50ul ，再加用1×标准品稀释液稀释5倍后的样本 ，加样量为50ul 。
4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干 。
5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔 ，室温（25-28℃）孵育60分钟 。
6.洗板5次 ，且最后一次置厚吸水纸上拍干 。
7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔 ，避光室温（25-28℃）孵育20分钟 。
8.洗板7次 ，且最后一次置厚吸水纸上拍干 。
9.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温（25-28℃）孵育20分钟 。
10.加入中止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值 。
结果判断:
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效 ，复孔的值平均后可作为测量值。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。
3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标 ，OD值作纵坐标 ，以平滑线连接各标准品的坐标点 。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度 。
4.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测 ，计算浓度时应乘以稀释倍数 。
典型数值和参考曲线
浓度pg/ml | 典型OD值1 | 典型OD值2 | OD平均值 |
0 | 0.0721 | 0.0667 | 0.0694 |
125 | 0.3032 | 0.2302 | 0.2667 |
250 | 0.4748 | 0.5596 | 0.5172 |
500 | 0.7425 | 0.9249 | 0.8337 |
1000 | 1.1328 | 1.1564 | 1.1446 |
2000 | 1.6735 | 1.5179 | 1.5957 |
4000 | 2.2354 | 2.0918 | 2.1636 |
AXL参考标准曲线
注意 ：本图仅供参考 ，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量 。
灵敏度 ，特异性和重复性:
1.灵敏度 ：多次重复结果表明 ，最小检出量为37pg/ml 。
2.特异性：与人BDNF,IL-1αIL-1β ， IL-2,IL-3,IL-4,IL-5,il - 10,IL-13,g - csf,gm - csf,IFN-γ, Leptin,MCP-1, SCF,TARC,TGF-β,TIMP-1,TIMP-2,TNF-α,TPO,VEGF等没有交叉反应性
3.重复性 ：板内 ，板间变异系数均<10%.
参考文献:
1. Minamitake, Y. et al. (1990) J. Biochem. 107:292.
2. Cameron, L. et al. (2000) J. Immunol. 164:1538.
3. Lipscombe, R. et al. (1998) J. Leukocyte Biol. 63:342.
4. Lalani, T. et al. (1999) Ann. Allergy Asthma Immunol. 82:317.
5. Gregory, B. et al. (2003) J. Immunol. 170:5359.
6. Denburg, J.A. et al. (1991) Blood 77:1462.
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