产品说明(可下载)人的C反应蛋白CRP定量分析酶联免疫检测试剂盒
本试剂盒仅供科研使用 。用于体外定量检测人血清 、血浆或细胞培养上清液中的CRP浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整 。如有产品包装破损或质量投拆 ，请在收到货一个月之内联系尊龙凯时人生就是搏。
CRP简介：
C反应蛋白（CRP）是人体内的急性反应蛋白，在人体免疫防御反应中重要的介导物 ，属于穿透素家族的蛋白。CRP蛋白的前体蛋白是224残基的蛋白，成熟的CRP有206个搭氨基酸残基，通过非共价结合的方式形成五聚体的环状结构 。
无论是感染还是非感染性的炎症 、组织坏死和恶性肿瘤时 ，人体血液中的CRP蛋白浓度都会急剧升高。在感染 ，炎症反应及组织坏死中 ，人血清中的CRP蛋白在24~48小时内可急剧升高到正常水平的1000倍 。
在许多种细菌和真菌表面的胆碱磷酸是CRP蛋白的配体，CRP与配体的结合是依赖Ca2+的 。CRP也可与受伤细胞的膜 、坏死的胞核和调亡的细胞等结合 。一旦与受体结合，CRP蛋白就会启动C1q ，从而引起一系列的级联反应 。CRP蛋白也会与吞噬细胞的表面Fcγ RI和Fcγ RII结合，从而启动吞噬细胞的吞噬反应。
CRP主要在肝内产生 ，IL-6是肝实质细胞产生CRP蛋白的主要介导物，此外IL-1和糖皮质激素也是CRP蛋白产生重要的诱导物。
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中CRP的浓度 。CRP捕获抗体已预包被于酶标板上 ，当加入标本或参考品时，其中的CRP会与捕获抗体结合 ，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。当加入与HRP耦连的抗人CRP抗体后 ，抗人CRP抗体与CRP接合 ，形成夹心的免疫复合物 ，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。最后加入显色剂 ，若样本中存在CRP将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质 ，在加入终止液后呈黄色 。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值 ，CRP浓度与OD450值之间呈正比 ，通过参考品绘制标准曲线 ，对照未知样本中OD值，即可算出标本中CRP浓度 。
人CRP定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:
组分 | 规格（96T/48T） |
人CRP预包被板 | 12条/6条 |
标准品稀释液 | 10ml/5ml |
人CRP标准品 | 8支/4支(冻干) |
HRP连接的抗体结合物 | 10ml/5ml |
浓缩洗涤液 20× | 30ml/15ml |
TMB底物 | 10ml/5ml |
终止液 | 5ml/3ml |
封板胶纸 | 3/2张 |
说明书 | 1份 |
标本收集:
1.标本的收集请按下列流程进行操作 ；
A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可 ；
B.血清标本应是自然凝固后 ，取上清 ，避免在冰箱中凝固血液；
C.血浆标本 ，推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测，
D.标本收集后请分装 ，冻存于－20℃ ，避免反复冻融。
2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂 ；
3.标本应清澈透明 ，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除 。
4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确 。
注 ：人血清或血浆样本请用标准品稀释液做倍比稀释后再检测 。
注意事项:
1.试剂盒请保存在2～8℃ 。
2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
3.标准品复溶加样后 ，剩余部分请丢弃 。
4.底物请勿接触氧化剂和金属 。
5.加样时 ，请及时更换枪头 ，避免交叉污染。
6.严禁混用不同批号的试剂盒组份 。
7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀 。
8.室温反应，请严格控制在25～28℃ 。
9.洗涤过程是至关重要的 ，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大 。
10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔 。
11.加样过程中避免气泡的产生 。
12.血清和血浆标本的检测时 ，检测抗体的孵育时间应适当延长。
检测前准备工作:
1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温（25～28℃）平衡20分钟；每次检测后剩余试剂请及时于2～8℃保存。
2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水) 。
3.如有5X准品稀释液 ，请按所需量用双蒸水或去离子水稀释(1份加4水)。
4.标准品: 按标签复溶体积加入标准品稀释液复溶使CRP终浓度达到100ng/ml ，室温反应 ，请严格控制在25～28℃，静置10~15分钟后轻轻混悬（建议抽吸几次）待彻底溶解 ，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。（标准曲线取七个点，最高浓度为100ng/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）
洗涤方法:
自动洗板机或人工洗板 ：每孔洗涤液为300ul，注入与吸出间隔15-30秒 。洗板5次。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。
实验过程需自备的材料 ：
1.不同规格的加样枪及相应的枪头 ；
2.酶标仪 ；
3.自动洗板机 ；
4.去离子水或双蒸水 ；
操作步骤:
1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数 ，取出所需板条放置在框架内 ，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃。
2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线 。
3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔 ，室温（25～28℃）孵育30分钟。如果是血清血浆样本，不同样本稀释比例不一样 ，一般范围在100~1000倍 ，如无明确范围 ，建议从200倍稀释 ，如果样本浓度过高 ，超过检测范围，请加大稀释倍数后重新稀释检测 。
4.洗板3次 ，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
5.加入HRP连接抗体工作液(100ul/孔) 。用封板胶纸封住反应孔 ，室温（25～28℃）孵育30分钟 。
6.洗板3次，且最后一次置厚吸水纸上拍干 。
7.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温（25～28℃）孵育20分钟 。
8.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值 。
结果判断:
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效 ，复孔的值平均后可作为测量值。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值 。
3.手工绘制标准曲线 。以标准品浓度作横坐标 ，OD值作纵坐标 ，以平滑线连接各标准品的坐标点 。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
4.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数 。
典型数值和参考曲线
浓度ng/ml | 典型OD值1 | 典型OD值2 | OD平均值 |
0 | 0.0467 | 0.0573 | 0.052 |
3.125 | 0.2008 | 0.2224 | 0.2116 |
6.25 | 0.3745 | 0.4207 | 0.3976 |
12.5 | 0.6529 | 0.7103 | 0.6816 |
25 | 0.9832 | 1.0852 | 1.0342 |
50 | 1.4261 | 1.4523 | 1.4392 |
100 | 2.0301 | 2.2481 | 2.1391 |
人CRP参考标准曲线
注意：本图仅供参考 ，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。
灵敏度 ，特异性和重复性:
1.灵敏度 ：多次重复结果表明 ，最小检出量为1.4ng/ml 。
2.重复性 ：板内 ，板间变异系数均<10%.
参考文献:
1. Johnson HL et al; Applications of acute phase reactants in infectious diseases J.
Microbiol. Immunol. Infect. 1999, 32: 73
2. Helgeson N et al; C - Reactive Protein : Laboratory Medicine, Vol. 2 (Race G. J., Ed.),Harper & Row, Hagerstown, chapter 29 (1973).
3. Gewurz H et al; C-Reactive Protein and the Acute Phase Response. Adv in Int Med, 1982,27: 345
4. Frank, R. and R. Hargreaves (2003) Nat. Rev. Drug Disc. 2:566.
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