产品说明(可下载)小鼠的趋化蛋白12定量分析酶联免疫检测试剂盒
本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的CXCL12浓度 。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整 。如有产品包装破损或质量投拆 ，请在收到货一个月之内联系尊龙凯时人生就是搏。
CXCL12简介：
CXCL12 ，也叫SDF-1 ，属于CXC趋化因子家庭。由位于10号染色体的的CXCL12基因编码 。有两种亚型SDF-1α和SDF-1β, SDF-1α是一个89个氨基酸的多肽，SDF-1β与SDF-1α相比，序列相同 ，只在C末端多了4个残基。SDF-1α是一个高度保守的蛋白，在人和小鼠间有99%的同源性 。
SDF-1由骨髓基质细胞表达 ，在包括心 、肝、脑 、肾 、骨骼肌和淋巴器官等许多器官都存在。
SDF-1作为一个高效的淋巴细胞趋化因子 ，能直接诱导和活化淋巴细胞在LPS、TNF和细胞因子等的免疫刺激作出应答，SDF-1作为单核细胞有效的化学诱导剂 ，能刺激B细胞增殖 。SDF-1似乎在淋巴细胞和造血细胞的运输和归巢中有一定的作用 。SDF-1已证明在肿瘤发生的过程中有重要的作用，包括刺激肿瘤细胞的生长 、恶化 、促进肿瘤血管增生、肿瘤转移等生理过程均有刺激作用 。
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中CXCL12的浓度。CXCL12捕获抗体已预包被于酶标板上 ，当加入标本或参考品时，其中的CXCL12会与捕获抗体结合 ，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。当加入生物素化的抗人CXCL12抗体后 ，抗人CXCL12抗体与CXCL12接合 ，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素 。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来 ；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。最后加入显色剂，若样本中存在CXCL12将会形成免疫复合物 ，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质 ，在加入终止液后呈黄色 。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，CXCL12浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线 ，对照未知样本中OD值 ，即可算出标本中CXCL12浓度 。
小鼠CXCL12定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:
组分 | 规格（96T/48T） |
小鼠CXCL12预包被板 | 12条/6条 |
样本分析缓冲液 | 5ml/3ml |
5×标准品稀释液 | 10ml/5ml |
小鼠CXCL12标准品 | 4支/2支(冻干) |
小鼠CXCL12生物素化抗体 | 10ml/5ml |
亲和素连接的HRP酶 | 10ml/5ml |
浓缩洗涤液 20× | 30ml/15ml |
TMB底物 | 10ml/5 ml |
中止液 | 5ml/3 ml |
封板胶纸 | 3/2张 |
说明书 | 1份 |
标本收集:
1.标本的收集请按下列流程进行操作；
A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可 ；
B.血清标本应是自然凝固后 ，取上清，避免在冰箱中凝固血液；
C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测，
D.标本收集后请分装，冻存于－20℃ ，避免反复冻融。
2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂 ；
3.标本应清澈透明 ，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除 。
4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测 ，否则结果将不准确。
注 ：小鼠血清或血浆样本请用样本分析缓冲液做倍比稀释后再检测 。
注意事项:
1.试剂盒请保存在2～8℃。
2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶 ，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
3.标准品复溶加样后，剩余部份请丢弃。
4.底物请勿接触氧化剂和金属 。
5.加样时 ，请及时更换枪头 ，避免交叉污染 。
6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。
7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀 。
8.室温反应 ，请严格控制在25～28℃ 。
9.洗涤过程是至关重要的 ，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大 。
10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔 。
11.加样过程中避免气泡的产生 。
12.血清和血浆标本的检测时 ，检测抗体的孵育时间应适当延长 。
检测前准备工作:
1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温（25～28℃）平衡20分钟；每次检测后剩余试剂请及时于2～8℃保存 。
2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水) 。
3.如有5X标准品稀释液，请按所需量用双蒸水或去离子水稀释(1份加4水) 。
4.标准品: 按标签复溶体积加入1X标准品稀释液复溶使使CXCL12终浓度达到3000pg/ml，室温反应，请严格控制在25～28℃，静置10~15分钟后轻轻混悬（建议抽吸几次）待彻底溶解 ，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。（标准曲线取七个点 ，最高浓度为3000 pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）
洗涤方法:
自动洗板机或人工洗板 ：每孔洗涤液为300ul ，注入与吸出间隔15-30秒 。洗板5次。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。
实验过程需自备的材料：
1.不同规格的加样枪及相应的枪头；
2.酶标仪 ；
3.自动洗板机 ；
4.去离子水或双蒸水 ；
操作步骤:
1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内 ，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封 ，保存于4℃。
2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液 。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。
3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中 ，用封板胶纸封住反应孔 ，室温（25～28℃）孵育120分钟 。如果是血清血浆样本，不同样本稀释比例不一样，一般范围在1~10倍，如无明确范围 ，建议从2倍开始，加样稀释说明如下 ：每孔先加样本分析缓冲液50ul，再加用1×标准品稀释液稀释1倍后的样本，加样量为50ul。
4.洗板5次 ，且最后一次置厚吸水纸上拍干 。
5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔) 。用封板胶纸封住反应孔 ，室温（25～28℃）孵育60分钟。
6.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干 。
7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔) 。用封板胶纸封住反应孔，避光室温（25～28℃）孵育20分钟。
8.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
9.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温（25～28℃）孵育20分钟。
10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值 。
结果判断:
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效 ，复孔的值平均后可作为测量值。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值 。
3.手工绘制标准曲线 。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度 。
4.若标本OD值高于标准曲线上限 ，应适当稀释后重测 ，计算浓度时应乘以稀释倍数。
典型数值和参考曲线
浓度pg/ml | 典型OD值1 | 典型OD值2 | OD平均值 |
0 | 0.1224 | 0.1281 | 0.12525 |
93.75 | 0.2942 | 0.3024 | 0.2983 |
187.5 | 0.4553 | 0.4296 | 0.44245 |
375 | 0.7754 | 0.7318 | 0.7536 |
750 | 1.018 | 1.0373 | 1.02765 |
1500 | 1.5371 | 1.5453 | 1.5412 |
3000 | 2.1963 | 1.9857 | 2.091 |
小鼠CXCL12 参考标准曲线
注意 ：本图仅供参考 ，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量 。
灵敏度，特异性和重复性:
1.灵敏度 ：多次重复结果表明 ，最小检出量为31.6pg/ml 。
2.特异性：与人和鼠的IP-10/CRG-2均无交叉反应性 ，能识别小鼠的SDF-1α 。
3.重复性：板内，板间变异系数均<10%.
参考文献:
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