小鼠白细胞介素10定量分析酶联免疫检测试剂盒

本试剂盒仅供科研使用
。用于体外定量检测小鼠血清
、血浆或细胞培养上清液中的IL-1O浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整


。如有产品包装破损或质量投拆，请在收到货一个月之内联系尊龙凯时人生就是搏。

IL-1O简介：

小鼠白介10（IL－10）是一个多效性的细胞因子



，在抑制激活的Th1细胞

、NK细胞和单核/巨噬细胞产生IL-1, GM-CSF, TNF, IL-6, IL-8, IL-12和 IFN-γ等细胞因子方面起重要的作用。同时在抑制巨噬细胞细胞毒活性性和B细胞、肥大细胞和T细胞的增殖和分化方面起重要的作用。

能产生小鼠IL-10的细胞很多
，包括激活的Th2细胞
、幼稚的胸腺细胞、单核/巨噬细胞、角化细胞、B细胞和神经胶质细胞等
。

虽然人的IL-10对小鼠的细胞有活性
，但小鼠的IL-10对人的细胞却没有活性
。小鼠IL-10与人IL-10无论从基因和氨基酸水平上



，非常类似

，与埃拔斯坦病毒基因组上一个开放读码框非常类似
，这可能使得小鼠IL-10在病毒的感染过程中起重要的作用


。

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中小鼠IL-10的浓度。小鼠IL-10捕获抗体已预包被于酶标板上
，当加入标本或参考品时


，其中的小鼠IL-10会与捕获抗体结合

，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗小鼠IL-10抗体后，抗小鼠IL-10抗体与小鼠IL-10接合




，形成夹心的免疫复合物
，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去
。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素

。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来

；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂
，若样本中存在IL-10将会形成免疫复合物

，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质


，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测
，读其450nm处的OD值
，小鼠IL-10浓度与OD₄₅₀值之间呈正比


，通过参考品绘制标准曲线

，对照未知样本中OD值
，即可算出标本中IL-10浓度
。

小鼠IL-10定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:

标本收集:

1.标本的收集请按下列流程进行操作
；

A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可



；

B.血清标本应是自然凝固后




，取上清


，避免在冰箱中凝固血液

；

C.血浆标本
，推荐用EDTA的方法收集


；

D.若待测样本不能及时检测
，标本收集后请分装
，冻存于－20℃，避免反复冻融。

2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；

3.标本应清澈透明

，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。

4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测
，否则结果将不准确。

注
：小鼠血清或血浆样本请用样本分析缓冲液做倍比稀释后再检测

。

注意事项:

1.试剂盒请保存在2～8℃
。

2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液



。

3.标准品复溶加样后


，剩余部份请丢弃
。

4.底物请勿接触氧化剂和金属。

5.加样时


，请及时更换枪头，避免交叉污染



。

6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。

7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要
，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。

8.室温反应
，请严格控制在25～28℃
。

9.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大
。

10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔
。

11.加样过程中避免气泡的产生。

12.血清和血浆标本的检测时
，检测抗体的孵育时间应适当延长
。

检测前准备工作:

1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温(25～28℃)平衡20分钟；每次检测后剩余试剂请及时于2～8℃保存
。

2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)
。

3.如有5X准品稀释液

，请按所需量用双蒸水或去离子水稀释(1份加4水)。

4.标准品: 按标签复溶体积加入标准品稀释液复溶使IL-10终浓度达到2000pg/ml，室温反应，请严格控制在25～28℃


，静置10~15分钟后轻轻混悬（建议抽吸几次）待彻底溶解
，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。（标准曲线取七个点



，最高浓度为2000 pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）

洗涤方法:

自动洗板机或人工洗板
：每孔洗涤液为300ul
，注入与吸出间隔15-30秒
。洗板5次


。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。

实验过程需自备的材料
：

1.不同规格的加样枪及相应的枪头；   

2.酶标仪；

3.自动洗板机
；                     

4.去离子水或双蒸水
；

操作步骤:

1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封

，保存于4℃
。

2.建议设置本底较正孔
，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液

。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线
。

3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中


，用封板胶纸封住反应孔，室温(25～28℃)孵育120分钟



。对于血清或血浆标本，请加入50 ul样本分析缓冲液后加50 ul标本，如稀释量大
，请将样本与样本分析缓冲液等量加入，不足部分用标准品稀释液补充至100ul
。     

4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干
。

5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)





。用封板胶纸封住反应孔，室温(25～28℃)孵育60分钟

。    

6.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔



，避光室温(25～28℃)孵育20分钟。

8.洗板5次
，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

9.加入显色剂TMB100ul/孔
，避光室温(25～28℃)孵育20分钟

。

10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD₄₅₀值



。

结果判断:

1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效
，复孔的值平均后可作为测量值
。

2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。

3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标
，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点

。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度



。

4.若标本OD值高于标准曲线上限





，应适当稀释后重测




，计算浓度时应乘以稀释倍数
。

典型数值和参考曲线

小鼠IL-1O参考标准曲线

注意

：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量
。

灵敏度

，特异性和重复性:

1.灵敏度
：多次重复结果表明，最小检出量为8.3pg/ml







。

2.特异性

：与小鼠IL-10 Sr

，人IL-10

、IL-10 sR等没有交叉反应。

3.重复性










：板内
，板间变异系数均<10%.

参考文献:

Fiorentino, D.F. et al. (1989) J. Exp. Med. 170: 2081.

Mosmann, T.R. (1994) Adv. Immunol. 56:1.

Takebe, Y. et al. (1988) Mol. Cell. Biol. 8:466.

Zdanov, A. et al. (1995) Structure 3:591.

Rode, H.J. et al. (1993) Virus Genes 7:111.