货号

H199

种属

人

细胞来源

从ATCC/中科院/协和医院等地引进

生长特性

贴壁 上皮样

培养条件

培养基：90%IMDM+10%FBS （推荐HAKATA优等胎牛血清
，货号:HN-FBS-500）

温度
：37℃     气相
：95%空气，5%二氧化碳

传代

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒
，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台

，打开瓶口，将其中的培养液去掉
，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养
，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代






，一般2到3天换一次液；

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%
，需要对其进行传代
，传代比例为1:2到1:6
；

3传代步骤


：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热
，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS

，轻晃洗涤后弃去



。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶
，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察






，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培养基终止消化
。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落
，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞
，进行传代

。

保存

冻存条件：80%完全培养基+10%FBS+10%DMSO

(备注







：建议使用本公司的冷冻液（H-W-100），用4度保存的冷冻液直接重悬细胞，不能预热后使用
。)

保存条件
：液氮存储

供应限制

经供研究之用

常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂，培养液有漏液
：细胞极大可能会污染，所以尊龙凯时人生就是搏会及时安排帮老师解决

。

2.收到细胞后尽快更换为新鲜培养基
。

3.细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察，如细胞大部分又贴回瓶底
，表明细胞活力正常
，剩余漂浮的细胞可以去掉

，留8-10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁
，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养

，中间注意观察
，尊龙凯时人生就是搏的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。