依我个人经验来说

，Hela细胞还是比较好养的细胞
。

生长特性为贴壁
，上皮样

我培养hela细胞所用的培养基为
：90%DMEM（L）+10%FBS(推荐使用HAKATA胎牛血清)

温度：37℃     气相：95%空气，5%二氧化碳

传代步骤
：

1. 首先用75%酒精对培养瓶进行消毒，令培养瓶平置于培养箱中进行1-3小时的缓冲。

然后放置于超净操作台
，打开培养瓶瓶口
，将其中的培养液去掉
，再往其中加入5-6ml新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养
。

根据细胞的生长状况以及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，换液时间一般为2到3天换一次。

2. 等到细胞长满瓶底面积的80%-90%，需要对其进行传代，传代比例为1:3到1:8


；

3. 传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热，并倒掉培养瓶中的培养基，网培养瓶加入中3-5mlPBS
，轻轻摇晃洗涤后弃去

。

4.    在培养瓶中加入1-2-ml预热好的胰酶，置于37°C孵育消化。(第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆

、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培养基终止消化

。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞


，使之完全脱落，然后收集细胞悬液


，1200rpm离心3min


，弃上清




，加入完全培养基重新悬浮细胞，进行传代。

细胞保存



：

1. 冻存配置

：80%完全培养基 + 10%FBS +10%DMSO

2. 我使用的是：HAKATA无血清细胞冻存液，从4度冰箱拿出
，直接重悬细胞
，之后直冻-80°C冰箱



，无需梯度降温



，无需配置冻存液。