我想在冷冻原料瓶后对THP-1细胞有一些建议 。我正在完美地培养这些细胞。我使用不含抗生素的ATCC推荐培养基 ，以200,000细胞/ ml的速度种植它们两到三天 ，并以800,000细胞/ ml通过它们。我确实超过了这个数字 ，但是当我将它们重新接种到200,000个细胞时 ，它们仍然会像以前那样生长 。所以在这一点上一切都很顺利 。
我扩增了细胞 ，直到我有足够的大约20个小瓶的细胞冷冻 ，每瓶8.5到950万个细胞（如ATCC建议的那样） 。我用血细胞计数器测量了细胞数 ，所以我不确定这个数字是否正确 。但是细胞在含有5％DMSO的完全培养基中缓慢冷冻。
在我冻结细胞后 ，我读到DMSO可以将细胞分化为巨噬细胞样细胞 ，应该避免 。我还读到，只是冻融这些细胞有时可以启动分化 。无论如何 ，我现在解冻了两个小瓶，我注意到它们不再像以前那样表现 。
他们不再像以前那样快速增长 。
2.少数细胞聚集在一起 。
3少数细胞已分化并附着在烧瓶表面 。
我想我可能只是注意到这些行为，因为我过度焦虑并寻找它们; 他们可能在那之前，但我没有看到他们 。
因此 ，如果有人在冻融后THP-1细胞表现出不同的问题那么请 ，任何建议都会非常感激吗 ？
您没有提到解冻后的初始细胞浓度或当前细胞数/活力 。我不确定你是如何解冻它们的 ，但这就是我的实验室如何解冻THP-1和其他易于与DMSO区分的细胞类型 。
对于一小瓶细胞 ，尊龙凯时人生就是搏在水浴中快速解冻它们 ，并在右上方T-25烧瓶中将1ml细胞加入25-30ml培养基中 。将细胞以直立位置（加盖）置于培养箱中3-4小时 。这将使细胞沉降到烧瓶底部。几小时后，小心地从培养箱中取出烧瓶 ，取出约20ml“旧”培养基 ，并用5-10ml新鲜培养基替换。然后将烧瓶以直立位置返回培养箱数天 。
首先 ，该方法允许以细胞友好的方式还原和去除DMSO 。其次 ，通过在直立式烧瓶中培养细胞数天，使细胞保持紧密接触并改善自分泌和旁分泌信号 ，从而改善细胞活力和生长 。几天之后 ，他们应该准备好去，并且可以以正常方式处理。
建议使用HAKATA无血清细胞冻存液 ，细胞重悬后直接放入-80°C冰箱过夜。
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