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      原代细胞如何取材,这些你都会吗 ?

      一、取材的基本要求
      1.取材要注意新鲜和保鲜
      2.应严格无菌
      3.防止机械损伤
      4.去除无用组织和避免干燥
      5.应注意组织类型 、分化程度、年龄等
      6.作好记录

      二 、各类组织的取材技术
      皮肤和粘膜的取材
      内脏和实体瘤的取材
      血液细胞的取材
      骨髓、羊水、胸/腹水细胞取材
      动物组织取材
      人胚体组织取材
      鸡(鸭)鸟类胚胎组织取材

      皮肤和粘膜的取材
      主要取自于手术过程中的皮片 ,方法似外科取断层皮片手术操作,但面积一般2~4c㎡。

      内脏和实体瘤的取材
      内脏除消化道外基本是无菌的,但取材时要明确和熟悉所需组织的类型和部位,实体瘤取材时要取肿瘤细胞丰富的区域,要避开破溃、坏死液化部分,以防污染,尽量去除混杂的结缔组织。

      血液细胞的取材
      血细胞 、淋巴细胞的取材 ,一般多抽取静脉外周血 ,或从淋巴组织中(如脾 、扁桃体、胸腺 、淋巴结等)分离细胞 ,取材时应注意抗凝。

      骨髓、羊水、胸/腹水细胞取材
      严格无菌,注意抗凝,还要尽快分离培养,离心后,用无钙、镁PBS洗两次,再用培养液洗一次后即可培养 ,不宜低温存放 。

      动物组织取材
      鼠胚组织取材
      首先用引颈或气管窒息致死法处死孕期合适的动物,然后将其整个浸泡在含有75%酒精的烧杯中,5min后(注意时间不能太长 ,以避免酒精从口或其他通道进入体内 ,影响组织活力),取出动物,在消毒过的木板上可用无菌的图钉或大头针固定四肢,切开皮肤,用无菌操作法解剖取胚或用无菌止血钳挟起皮肤 、用无菌眼科剪沿躯干中部环形剪开皮肤 ,用止血钳分别挟住两侧皮肤拉向头尾 ,把动物反包 ,暴露躯干,然后再固定 ,更换无菌解剖器材 ,采用无菌操作法解剖取出胚胎 。

      幼鼠胚肾(或肺)取材
      幼鼠采用上述方法处死消毒后,腹部朝上固定在木板上,先切开游离毛皮并拉开至两侧 :然后采用无菌法打开胸腔取肺,或背部朝上固定在木板上 ,先将背部毛皮切开游离并拉向两侧 ,然后采用无菌法从背部打开腹腔取肾 。

      人胚体组织取材
      取材方法与鼠类相同
      鸡(鸭)鸟类胚胎组织取材步骤
      (1)取孵化至适当胚龄(9~12天)的胚蛋 ,用照蛋灯在暗处灯检 ,若有丰富血管 、胚体有运动的胚蛋 ,说明胚体发育良好,并用有色笔划出气室和胚体位置。
      (2)将胚蛋置于蛋架上,先用温水清洗蛋壳,再用75%酒精棉球擦干;
      (3)经碘酒、75%酒精消毒后,在无菌条件下采用无菌法用剪刀或中号镊子打开气室 ,沿气室边缘去除蛋壳;
      (4)用眼科镊撕去壳膜 ,暴露出鸡胚;
      (5)用弯头镊轻挑起胚头 ,取出胚胎,放入无菌平皿中,解剖取材。

      公司简介 / Company profile
      上海尊龙凯时人生就是搏生物科技有限公司
      Shanghai Chuan Qiu Biotechnology Co.,Ltd.
             公司主要依托复旦大学、同济大学等上海地区多家著名高校,拥有一支富有经验的开发团队,专业从事细胞及细胞...
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